Einfluss der RNA-Integrität auf die quantitative real-time RT-PCR

Die mRNA-Quantifizierung via real-time RT-PCR (qRT-PCR) findet heute Anwendung in einer Vielzahl molekularbiologisch orientierter Labore. Die Methode birgt allerdings – gerade im Bereich der Prä-Analytik – zahlreiche Fehlerquellen. Vor allem die Messung der RNAQualität führt bis dato noch ein Schattendasein. Das führt häufig zu ungenauen Ergebnissen oder zu erheblichen Variationen in den Expressionsergebnissen. Die Optimierung und Standardisierung der prä- und post-PCR stellen somit eine besondere Herausforderungen bei einer validen mRNA-Quantifizierung dar. Einmal mehr zeigt sich die Gesetzmäßigkeit, dass die Präzision der mRNA-Genexpressionsanalyse durch die Quantität und Qualität des Ausgangsmaterials, der total-RNA, signifikant beeinflusst wird. Die größte Verbesserung verspricht die Optimierung der Probenaufbereitung und die Bestimmung der RNA-Integrität, sowie die verbesserte Verrechnung der erhaltenen real-time RT-PCR-Daten.